Screeningov? elektrofor?za

Rozd?luje b?lkoviny krevn?ho s?ra podle jejich fyzik?ln? - chemick?ch vlastnost? v elektrick?m poli na agar?zov?m gelu do 6 frakc? (albumin a globuliny: ? alfa-1, alfa-2, beta-1,? beta-2, gama). Za patologick?ch stav? m??e doch?zet ke zm?n?m v zastoupen? r?zn?ch frakc?, vymizen? frakce nebo p??tomnosti atypick? frakce. Ur?it? chorobn? stavy tak mohou vytv??et typick? obraz, tzv. pattern:

Akutn? z?n?t:	↑ alfa-1, ↑ alfa-2, (↓ beta-1)
Chronick? z?n?t:	↓ albuminu, (↑ alfa-1, ↑ alfa-2), ↓ beta-1, ↑ gama
Chronick? aktivn? hepatopatie:	↓ albuminu, ↑ gama
Cirh?za:	↓ albuminu, (↓ beta-1, alfa-1, alfa-2), ↑↓ gama, celkov? hypoprotein?mie
Monoklon?ln? gamapatie:	atypick? gradient, event. migra?n? heterogenita nebo pouze hypogamaglobulin?mie, ↑ gama, (↓ albumin)
Nefrotick? syndrom:	↓ albumin, ↑ alfa-2, ↓ gama
Malnutrice:	↓ albumin, alfa-1, alfa-1, beta-1, gama, celkov? hypoprotein?mie

Indikace:

- Vstupn?: orienta?n? informace o p??tomnosti/nep??tomnosti atypick? frakce, z?n?tliv? reakce, hyper‑/hypogamaglobulin?mii, hypoprotein?mii.

- Sledovan? pacienti (nap?. chronick? z?n?ty, chronick? hepatopatie, hypo-/hypergamaglobulin?mie): p?i kontrole je l?pe sledovat koncentrace imunoglobulin?, event. specifick? markery aktivity onemocn?n?. Vzhledem k biologick?mu polo?asu a informa?n? hodnot? vy?et?en? nen? doporu?eno vy?et?ovat ?ast?ji ne? za 3 a v?ce m?s?c?.

Hodnocen?: Semikvantitativn?, % zastoupen?m frakc?, s p?epo?tem na jejich koncentraci p?i znalosti koncentrace celkov? b?lkoviny

Zv??en? frakce:

Albumin:? neprokazateln?, klinicky nev?znamn? (pouze u t?k? dehydratace)

Alfa-1:?????? akutn? z?n?ty, v gravidit?, p?i dlouhodob? terapii estrogeny

Alfa-2:?????? nefrotick? syndrom, masivn? proteinurie (alfa-2-makroglobulin), p?i akutn?m z?n?tu a z?t?i

???????????????? (haptoglobin), paraprotein

Beta-1:????? deficit ?eleza (transferin), intravaskul?rn? hemol?za (voln? hemoglobin), gravidita, pod?v?n? estrogen? a HAK s vy???m obsahem estrogen?, paraprotein

Beta-2:????? dekompozice C3 slo?ky komplementu (u star??ch vzork?)

Gama:?????? monoklon?ln? (paraprotein) nebo polyklon?ln? hypergamaglobulin?mie (po infek?n?m

???????????????? onemocn?n?, ?asn? f?ze chronick?ch z?n?t?, d?letrvaj?c? z?n?tliv? onemocn?n?, chronick?

???????????????? aktivn? hepatopatie, syst?mov? onemocn?n? pojiva, n?kdy i malignita)

tzv. migra?n? heterogenita gamaglobulin?: paraprotein, nebo projev d?letrvaj?c?ho onemocn?n? s intenzivn? imunitn? reakc?, vysok? koncentrace CRP nebo RF, crush sy a jin? svalov? po?kozen?.

V z?vislosti na ostatn?ch n?lezech a klinick?m stavu doporu?ujeme v koment??i doplnit o ?imunoelfo?.

Sn?en? frakce:

Albumin:???? proteino-kalorick? malnutrice, pokro?il? cirh?za, chronick? z?n?tliv? stavy, ztr?ty mo??, st?evem,

?????????????????? rann?mi plochami, celkov? t?k? stavy

Alfa-1:???????? p?i celkov? hypoprotein?mii, u vrozen?ch deficit? alfa-1-antitrypsinu

Alfa-2:???????? intraven?zn? hemol?za (haptoglobin)

Beta-1:???????? akutn? z?n?t, proteino-energetick? malnutrice, kritick? stavy

Beta-2:???????? stavy spojen? s tvorbou CIK ? konzumpce C3 (nap?. akutn? GN, chronick?

?????????????????? membranoproliferativn? GN, SLE, hemolytick? an?mie)

Gama:???????? hypogamaglobulin?mie p?i r?zn?ch imunodeficitn?ch stavech, dlouhodob? terapie glukokortikoidy, monoklon?ln? gamapatie

Referen?n? meze:???????? viz Laboratorn? p??ru?ka OKB

Vy?et?uje:??????????????????? rutinn? provoz OKB - ?sek elektrofor?zy a speci?ln?ch anal?z, v?sledky do 7 dn?

Materi?l:????????????????????? sr?liv? krev

Stabilita:????????????????????? 14 dn? p?i +2 a? +8 ?C, n?kolik m?s?c? p?i -20 ?C

K?d ??seln?ku VZP:????? 81397 (63 bod?), nen? agregov?no do l??kodne

V?echny n?lezy na screeningov?m elfo kontroluj? l?ka?i OKB. Je-li p??tomen u nov?ho pacienta ve screeningov? elektrofor?ze atypick? gradient:

a) je-li dostatek prim?rn?ho materi?lu, je elektrofor?za dopln?na o FLC a Ig, po?aduj?c? odd?len? dod? ??danku na imunoelfo, event. se vzorkem rann? mo?e (podle charakteru n?lezu a telefonick? dohody s o?et?uj?c?m l?ka?em). V koment??i k v?sledk?m je pozn?mka ?n?lez atyp. gradientu ve screen. elfo, imunoelfo po dohod? provedeno z prim?rn?ho materi?lu?.

b) nen?-li dostatek prim?rn?ho materi?lu, po konzultaci s o?et?uj?c?m l?ka?em je odd?len? po??d?no o nov? odb?r spole?n? se ??dankou o imunoelfo; elektrofor?za se v tomto p??pad? ji? neprov?d?, pouze vy?et?en? FLC a imunofixace.

?Imunoelfo?

Je elektrofor?za dopln?n? o kvantitativn? stanoven? koncentrac? IgG, IgA a IgM, a interpreta?n? koment??. Nejedn? se o imunoelektrofor?zu v prav?m slova smyslu, tj. o kombinaci elektroforetick?ho d?len? s imunodifuzn?m (reakci jednotliv?ch b?lkovin na gelu s polyklon?ln?m antis?rem). Je vhodn? sou?asn? vy?et?it i mo? na p??tomnost proteinurie. U n?lez? s nov?m atypick?m gradientem nebo nejednozna?n?ch s heterogenitou v gamaglobulinov? frakci a u v?t?iny sledovan?ch hematologick?ch pacient? je vy?et?en? v krvi dopln?no o stanoven? voln?ch lehk?ch ?et?zc? imunoglobulin? (FLC), event. imunofixa?n? elektrofor?zu k typizaci atypick? frakce. Je-li p??tomen monoklon?ln? protein (paraprotein), je kvantifikov?n.

Na ??danku je t?eba ps?t kr?tk? parere (patologick? n?lezy vedouc? k indikaci, dif. dg ?vaha) ? nutn? pro c?lenou volbu n?sledn?ch dopl?uj?c?ch vy?et?en? (FLC, imunofixace), zejm?na u prvn?ho vy?et?en?; u sledovan?ch nebo l??en?ch pacient? je vhodn? uv?st v?znamn? zm?ny stavu od posledn? kontroly, definitivn? diagn?zu, je-li stanovena, za??tek nebo ukon?en? l??by.

Sou??st? v?sledkov?ho listu je v?dy slovn? popis n?lezu. Je-li t?eba kontroln? vy?et?en?, je doporu?en ?asov? interval dal?? kontroly.

Indikace:

- Vstupn?: diagnostika a diferenci?ln? diagnostika onemocn?n? spojen?ch s p??tomnost? paraproteinu (zejm?na mnoho?etn? myelom, AL-amyloid?za, light chain deposition disease a ostatn? monoklon?ln? gamapatie), c?len? k dal??mu vy?et?en? p?i z?chytu atypick? frakce ve screeningov? elektrofor?ze (viz v??e)

- Sledov?n?: ji? diagnostikovan? monoklon?ln? gamapatie, jin? hematologick? onemocn?n? se sekund?rn? p??tomnost? paraproteinu, jin? onemocn?n? spojen? s dysregulac? synt?zy imunoglobulin? (c?len?)

Referen?n? meze:????? IgG, IgA a IgM, FLC - viz Laboratorn? p??ru?ka OKB

Vy?et?uje:????????????????? rutinn? provoz OKB - ?sek elektrofor?zy a speci?ln?ch anal?z,
v?sledky ze s?ra jsou obvykle do 10 dn? uvoln?ny do NIS, po dopln?n? o v?sledky elfa mo?e (vzorky se mraz? a analyzuj? jednor?zov? v s?rii) obvykle do 14 dn? je kompletn? v?sledek znovu uvoln?n do NIS a vyti?t?n

Materi?l:??????????????????? sr?liv? krev

Stabilita:?????????????????? 7 dn? p?i +2 a? +8 ?C, n?kolik m?s?c? p?i -20 ?C

Metoda stanoven?:???? elektrofor?za na agar?ze (Interlab)

??danka:?????????????????? speci?ln? ? ?Vy?et?en? p?i podez?en? na paraprotein?mii/paraproteinurii?

K?d ??seln?ku VZP:?? S?rum: 81397 (63 bod?), mo?: 81395 (355 bod?), nen? agregov?no do l??kodne

?Voln? lehk? ?etezce imunoglobulin?, free light chains (FLC)

Voln? lehk? ?et?zce Ig obou antigenn?ch typ? (kappa i lambda) jsou fyziologicky produkov?ny p?i tvorb? imunoglobulin?. Jejich koncentrace v krvi se udr?uje v pr?b?hu ?ivota p?i stabiln?ch ren?ln?ch funkc?ch v ?zk?m referen?n?m rozmez? v?etn? jejich indexu K/L.

U monoklon?ln?ch gamapati? doch?z? ?asto k dysregulaci synt?zy imunoglobulin?; patologick? klonus produkuje krom? kompletn?ho monoklon?ln?ho imunoglobulinu nebo jeho sou??st? ?asto zv??en? rovn? jeden antigenn? typ voln?ch lehk?ch ?et?zc? (FLC). M?ra poruchy synt?zy je individu?ln?. Patologick? pom?r obou ?et?zc? (index K/L) je u v?t?iny nemocn?ch nep??m?m znakem klonality, nen? v?ak p??tomen u v?ech nemocn?ch s monoklon?ln? gamapati?.

P?i polyklon?ln? imunitn? stimulaci m??e ?asto doch?zet k vzestupu koncentrace obou FLC (a? na n?kolikan?sobek), obvykle se v?ak nem?n? index K/L.

Index K/L je v?znamn?m rizikov?m faktorem rychl? progrese u v?t?iny monoklon?ln?ch gamapati?.

U stabilizovan?ch gamapati? (nej?ast?ji n?zce rizikov? MGUS nebo sekund?rn? paraprotein?mie) je synt?za voln?ch lehk?ch ?et?zc? u t?ho? nemocn?ho po celou dobu onemocn?n? relativn? st?l?, k vzestupu koncentrace sekre?n?ho typu ?et?zce doch?z? v?jime?n?, p?i progresi onemocn?n?. U nemocn?ch se st?edn? / vysoce rizikov?m MGUS a malign? monoklon?ln? gamapati? (mnoho?etn? myelom v?etn? tzv. doutnaj?c?ho myelomu, AL-amyloid?za, LCDD, Waldenstr?mova makroglobulin?mie) jsou prognosticky v?znamn?j?? zm?ny v ?ase ne? absolutn? hodnota vstupn? koncentrace FLC.? U jin?ch hematologick?ch malignit (nap?. CLL, NHL) event zm?ny FLC odr?ej? aktivitu onemocn?n? a jsou prognostick?m markerem.

Laboratorn? progrese obvykle p?edch?z? klinickou. Vzhledem k jejich velmi kr?tk?mu biologick?mu polo?asu zm?ny koncentrace FLC jsou detekovateln? d??ve ne? zm?ny v koncentraci monoklon?ln?ho Ig (??dov? o t?dny, podle individu?ln?ho polo?asu IgG, IgA i IgM).

FLC jsou voln? filtrovan? glomeruly a t?m?? ?pln? resorbovan? v tubulech, v mo?i jsou fyziologicky p??tomny stopov?. P?i p?ekro?en? ren?ln?ho tubul?rn?ho prahu se FLC objevuj? v mo?i jako tzv. Bence-Jonesova b?lkovina. P?i zhor?ov?n? glomerul?rn? filtrace s jej?m poklesem doch?z? k vzestupu koncentrac? obou typ? ?et?zc? a? na n?kolikan?sobek, v?ce u FLC-K, index κ/λ se pohybuje v tzv. ren?ln?m referen?n?m rozmez?.

U nemocn?ch s monoklon?ln? gamapati? se v mo?i FLC objevuj? opo?d?n? (po p?ekro?en? ren?ln?ho tubul?rn?ho resorp?n?ho prahu, v z?vislosti na individu?ln? m??e jejich synt?zy, minim?ln? v?ak po v?ce ne? 6 m?s?c?ch).

P?i elektrofor?ze s?ra jsou FLC detekovateln? pouze ve vysok? koncentraci, v z?vislosti na koncentraci polyklon?ln?ch rezidu?ln?ch imunoglobulin?.

Stanoven? FLC je sou??st? vy?et?en? ?imunoelfa?. Nelze je pou??t samostatn? jako screening monoklon?ln? gamapatie (v?ce ne? 50 % nemocn?ch s MGUS, kter? je nej?ast?j?? monoklon?ln? gamapati?, m? p??tomn? monoklon?ln? Ig bez zm?ny koncentrace FLC nebo indexu K/L)!

Indikace:

Vstupn?:

- v r?mci ?imunoelfa? u nov?ho n?lezu atypick?ho gradientu,

- dif. dg. etiologicky nejasn?ch n?lez? klinick?ch i laboratorn?ch p?i podez?en? na p??tomnost paraproteinu,

Sledov?n?:

- u v?t?iny pacient? s monoklon?ln? gamapati? (v individu?ln? frekvenci monitorov?n? podle charakteru a v?voje onemocn?n?)

- u ostatn?ch pacient? podle n?lezu v elfo, je-li t?eba pro hodnocen?

Referen?n? rozmez?:

voln? lehk? ?et?zce typu kappa (FLC-K):?????????????????? 3,3 - 19,4 mg/l

voln? lehk? ?et?zce typu lambda (FLC-L):???????????????? 5,7 - 26,3 mg/l

index κ/λ????????????????????????????????????????????????????????????????? 0,26 - 1,65

p?i ren?ln? insuficienci???????????????????????????????????????????? 0,37 - 3,17

Interpretace:

a) zv??en? s patologick?m K/L: u v?t?iny malign?ch monoklon?ln?ch gamapati? (mnoho?etn? myelom v?etn? tzv. doutnaj?c?ho myelomu, AL-amyloid?za, LCDD, Waldenstr?mova mykeoglobulin?mie, v?ce ne? 50 % MGUS, p?i jin? dysregulaci synt?zy Ig (v?jime?n? u syst?mov?ch onemocn?n? pojiva, chronick?ch aktivn?ch hepatopati?, sekund?rn?ch paraprotein?mi? u jin?ch malignit),

b) zv??en? bez patologick?ho K/L: polyklon?ln? stimulace, sn?en? glomerul?rn? filtrace

c) sn?en? bez patologick?ho K/L: v?znamn? hypogamaglobulin?mie

Vy?et?uje:????????????????? rutinn? provoz OKB - ?sek elektrofor?zy a speci?ln?ch anal?z,
sou?asn? s ?imunoelfem?, v?sledky obvykle do 10 dn?

Materi?l:??????????????????? sr?liv? krev, vzorek rann? mo?e

Stabilita:?????????????????? 7 dn? p?i +2 a? +8 ?C, n?kolik m?s?c? p?i -20 ?C

Metoda stanoven?:???? elektrofor?za na agar?ze (Interlab), FLC - nefelometrie (Immage, Beckman Coulter)

??danka:?????????????????? speci?ln? ? ?Vy?et?en? p?i podez?en? na paraprotein?mii / paraproteinurii

K?d ??seln?ku VZP:?? 91167 (308 bod?) pro ka?d? ?et?zec, nen? agregov?no do l??kodne

Imunofixace (IFx)

Elektrofor?za je dopln?n? o specifickou reakci s protil?tkami proti jednotliv?m t??d?m Ig a ob?ma typ?m FLC (anti-IgG, anti-IgA, anti-IgM, anti-FLC-k, anti-FLC-L). Imunofixace typizuje t??du a typ monoklon?ln?ho imunoglobulinu.

Indikace:

- automaticky u nov?ho n?lezu atypick?ho gradientu v elektrofor?ze k jeho typizaci

- k vylou?en? p??tomnosti monoklon?ln?ho proteinu v p??pad? nejasn?ho n?lezu v elektrofor?ze

- u nov?ch hematologick?ch pacient? s anamn?zou paraproteinu v jin? laborato?i, av?ak bez bli??? specifikace, tj. podobn? jako nov? n?lez

- u klinick? susp. na amyloid?zu, je-li na ??dance uvedeno (je doporu?eno v guidelines)

- u sledovan?ch pacient?, kde doch?z? v ?ase ke zm?n? n?lezu, po terapii i bez terapie

- v p??pad? AG ve screen. elfo na z?klad? telefonick? domluvy s o?et?uj?c?m l?ka?em, je-li dostatek prim?rn?ho materi?lu (z alikvotu na elfo, event. + zbytek provozn?ho s?ra), spole?n? s FLC a Ig, odd?len? dod? ??danku na imunoelfo, v popisu n?lezu je pozn?mka ?n?lez atyp. gradientu ve screen. elfo, imunoelfo po dohod? provedeno z prim?rn?ho materi?lu?

Vy?et?uje:????????????????? rutinn? provoz OKB - ?sek elektrofor?zy a speci?ln?ch anal?z,
v?sledky obvykle do 14 dn?

Materi?l:??????????????????? viz imunoelfo

Stabilita:?????????????????? 14 dn? p?i +2 a? +8 ?C, n?kolik m?s?c? p?i -20 ?C

Metoda stanoven?:???? imunofixa?n? elektrofor?za (Interlab)

K?d ??seln?ku VZP:?? 91197 (1210 bod?), nen? agregov?no do l??kodne